Tirzepatido priemaišos

Tirzepatido priemaišos|Tilpeptido priemaišų kontrolė|Priemaišų pritaikytos sintezės ir struktūros patvirtinimas|Mokslas{0}}Peptidas

Tirzepatido priemaišų kontrolė -, skirta GLP-1/GIP dvigubai-tikslinių vaistų kokybės tyrimams, bendriems vaistų ataskaitų teikimui.Science-Peptidas suteikia individualią su tilpeptidu susijusių priemaišų sintezę, įskaitant deletinius peptidus, oksiduotas struktūrines priemaišas, riebalų rūgščių šveitimo produktus ir kt. spektroskopijos tyrimas su struktūros patvirtinimo duomenimis. Sveiki atvykę į mus susisiekti.

Tirzepatidas (Tirzepatidas) yra GLP-1/GIP dvigubas agonistas, kurį sugalvojo Eli Lilly, ir jis veikė visus šiuos dvejus metus. Jis turi gerą cukraus kiekį mažinantį ir stiprų svorį mažinantį poveikį ir yra vadinamas atnaujinta „stebuklingojo vaisto svorio metimui“ versija. Namų gamintojų peptidinių generinių vaistų, daugelis į tai spokso – pasibaigus patento galiojimo laikui, kas pirmas galės pabėgti per tyrimų kokybę, kas turės galimybę griebti pirmąjį generinį.

 

Tačiau tilpeptido kokybę nėra taip lengva ištirti. Jis yra sudėtingesnis nei simetikonas, jame yra 39 aminorūgštys, riebalų rūgščių šoninė grandinė (eikozandio rūgštis) ir jungtis. Priemaišų, kurios gali atsirasti sintezės proceso metu, yra daug daugiau nei įprastų peptidų. Trūkstamų peptidų, oksidacinių priemaišų, riebalų rūgščių išskyrimo produktų, dimerų, jungiamųjų -priemaišų turi būti kontroliuojama, kiekviena turi būti skaidra.

 

Esame sukaupę daug patirties kompleksinių peptidinių priemaišų sintezėje. Mes specializuojamės tilpeptido tyrime ir žinome, kokie yra jo priemaišų profilio sunkumai ir kokie yra pagrindiniai kontrolės elementai. Įvairių tilpeptidinių priemaišų kontrolės priemonių sintezę galime pritaikyti pagal jūsų poreikius su struktūros patvirtinimo duomenimis ir padėti nustatyti metodą, kad paduodami būtų mažiau tikėtina, kad gausite priedą.

Tilpeptido molekulinė struktūra lemia, kad jo priemaišų profilis yra daug sudėtingesnis nei bendrųjų peptidų. Kai atliekame priemaišų tyrimus, daugiausia dėmesio skiriame šioms kategorijoms:

Trūksta peptido
39 aminorūgštys, iš kurių bet kuri sintezės proceso metu praleidžiama, yra priemaiša. Trūkstamų peptidų sulaikymo laikas HPLC buvo plačiai paskirstytas, skirtingose ​​padėtyse trūkstamų peptidų poliškumas buvo skirtingas. Kai kurių trūksta N-gale, kai kurių – viduryje, o kai kurių – prie riebalų rūgščių prisitvirtinimo vietos. Gavome kliento užsakymą dėl 15 trūkstamų peptidų skirtingose ​​​​padėtyse, kad būtų galima lokalizuoti visas galimas trūkstamas priemaišas jų procese.

Oksiduojančios priemaišos
Metas tilpeptido sekoje yra jautrus oksidacijai į sulfoksidą, o po to į sulfoną. Oksiduotų priemaišų dažnai atsiranda stabilumo tyrimuose ir po tam tikro laiko auga. Atlikome palyginimą, pagreitintomis sąlygomis mėnesį oksidacijos pikas gali išaugti iki daugiau nei 0,3%, be kontrolės.

Riebalų rūgščių išsiskyrimo produktai
Tai unikali tilpeptidui būdinga priemaiša. Jo riebalų rūgščių šoninė grandinė (eikozandio rūgštis) yra prijungta prie lizino per jungiklį, ir ši modifikacija gali iš dalies išsiskirti sintezės arba saugojimo metu, todėl riebalų rūgštys{1}}pašalina priemaišas. Problematiškiau yra tai, kad išsiskyrimas gali vykti skirtingose ​​vietose - tarp riebalų rūgšties ir jungiklio arba tarp jungties ir peptido -, todėl susidaro skirtingos priemaišos. Savo klientams susintetinome keletą su riebalų rūgštimis{6}}susijusių priemaišų – nuo ​​visiško išsiskyrimo iki nedidelės dalies.

Dimerai/polimerai
Dvi ar daugiau tilpeptidų molekulių susikaupia, kad susidarytų dimeras arba didesnis. Dimero molekulinė masė yra du kartus didesnė už pagrindinės smailės, o HPLC smailė dažnai yra plati, todėl ją reikia specialiai atskirti ir išgryninti, kad būtų galima naudoti kaip kontrolę. Paruošėme dimerus ir prireikė kelių valymo ciklų, kad būtų pasiektas didesnis nei 95 % grynumas.

Linker{0}}susijusios priemaišos
Tilpeptido riebalų rūgščių modifikacijai naudojamas jungiklis (pvz., -Glu, PEG ir kt.), o pats šis jungiklis sintezės metu gali sukelti šalutinių reakcijų, generuodamas priemaišas su trūkstamais arba nepilnais jungikliais. Tokios priemaišos nėra randamos įprastuose peptiduose, bet būdingos tik tilpeptidui, kurį reikia specialiai ištirti.

Deamiduotos priemaišos
Asparaginas (Asn) ir glutaminas (Gln) lengvai deamidinami rūgštinėmis arba kaitinimo sąlygomis, todėl susidaro izomerai. Tilpeptido sekoje yra keletas Asn ir Gln, o deamidacijos priemaiša dažnai atsiranda atliekant priverstinio skilimo testą, todėl priemaišos vietai nustatyti turi būti naudojamas kontrolinis produktas.

Diastereoizomerai
Ilgos grandinės sintezės metu atskiros aminorūgštys gali būti racemizuojamos, todėl susidaro diastereoizomerai. Šios rūšies priemaišų kiekis paprastai nėra didelis, tačiau ekspertai paklaus deklaruodami, o patvirtinimui geriau turėti kontrolinį produktą.

Daugelio šių priemaišų negalima nusipirkti ir jas reikia susintetinti pagal užsakymą. Mes atlikome daug projektų, susijusių su tilpeptidinių priemaišų pritaikymu, apimdami visas aukščiau nurodytas kategorijas.

Peptidų serijos ištrynimas
We synthesize whatever is missing. For example, the lysine at position 20 is missing, or the amino acid near the fatty acid attachment site is missing. We will synthesize according to your process impurity profile, and the purity is usually >95%, su MS ir BMR patvirtinimu. Mes susintetinome peptidų rinkinį su 5 aminorūgščių atstumu nuo N-galo iki C-galo.

Oksiduojančios priemaišos
Met in Tilpeptide is oxidized to sulfoxide or sulfone, and we can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control product. We can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control. The purity is >95 %, o oksidacijos laipsniui patvirtinti galime pateikti LC-MS spektrą. Sulfoksidas ir sulfonas yra atskirti HPLC, ir mes galime padaryti abu.

Riebalų rūgščių išsiskyrimo produktai
Tai viena iš sunkiausių tilpeptido priemaišų. Riebalų rūgščių grandinė gali būti visiškai arba iš dalies išjungta (pvz., trūksta kelių paskutinių anglies junginių). Galime susintetinti daugybę variantų skirtingoms grandinės padėčiai. Viename iš sudėtingiausių mūsų atliktų projektų klientas paprašė susintetinti priemaišą, kurios riebalų rūgščių grandinėje trūksta 8 anglies atomų, ir prireikė dviejų mėnesių, kad tai būtų padaryta teisingai.

Dimeris
Dimerai, susidarę kryžminės{0}}arba ne-kovalentinės sąveikos būdu, gali būti paruošti skirtingais metodais ir izoliuoti bei išgryninti, kad būtų užtikrintas didelis grynumas. Dimerus valyti sunku, tačiau turime patirties, kaip atskirti monomerus.

Linker{0}}susijusios priemaišos
Gali trūkti sąsajos (-Glu, PEG ir t. t.) arba ji gali būti neužbaigta, todėl gali atsirasti susijusių priemaišų. Galime susintetinti įvairius variantus su trūkstamais linkeriais, sutrumpintais linkeriais arba nesuderintais linkeriais ir padėti jums sukurti tokių priemaišų spektrus.

Deamiduotos priemaišos
Sekos Asn ir Gln vietoms galime paruošti deamiduotų priemaišų kontrolę priverstinio skaidymo arba tikslinės sintezės būdu. Molekulinės masės skirtumas po deamidacijos yra tik 1, o tai nėra lengva atskirti pagal MS, todėl dažniausiai patvirtinimui naudojame BMR arba specialias chromatografines sąlygas.

Kitos pritaikytos priemaišos
Jei tyrime radote naują nežinomą priemaišą, galime padėti išanalizuoti struktūrą ir ją susintetinti. Atsiųskite mums pavyzdžius, mes atliksime LC-MS analizę, nustatysime struktūrą, tada kryptinę sintezę ir palyginsime sulaikymo laiką bei masės spektrą, kad patvirtintume susitarimą. Šį procesą atlikome daug kartų ir sėkmės rodiklis yra gana didelis.

Analitinio metodo kūrimas ir patvirtinimas
Nustatant HPLC arba LC-MS metodą, priemaišų kontrolė reikalinga lokalizacijai, atskyrimui nustatyti, tiesinio diapazono patikrinimui ir regeneravimui. Be valdymo metodo patvirtinimo trūksta dalies. Daugelis klientų prašo mūsų pirmiausia atlikti keletą pagrindinių nešvarumų, kad nustatytų metodą, o tada lėtai užpildyti likusią dalį.

Heterogeninė masių spektrometrija
Kai deklaruojamas generinis vaistas, būtina atlikti išsamią kokybinę ir kiekybinę proceso priemaišų ir skilimo produktų analizę. Kiekvienos priemaišos vietą, turinį ir struktūrą turi patvirtinti kontrolinis produktas. Mes matėme, kad deklaracija buvo išsiųsta užpildyti, devynis kartus iš dešimties šio gabalo priemaišų nesuprato.

Stabilumo tyrimai
Atliekant ilgalaikio stabilumo ir pagreitintus bandymus, būtina nustatyti, kurie skilimo produktai yra dominuojantys ir kokia turinio tendencija. Naudodami priemaišų kontrolę galime tiksliai įvertinti ir stebėti. Klientas atliko tilpeptido paruošimo stabilumą ir nustatė, kad skilimo smailė labai greitai išaugo pagreitintomis sąlygomis, todėl išanalizavome ir susintetinome MS, kad patvirtintume struktūrą, o tada klientui palengvėjo pranešęs.

Partijos išleidimo bandymas
Po pateikimo į rinką kiekviena API arba formuluotė turi būti išbandyta dėl atitinkamos medžiagos. Priemaišų kontrolė yra pagrindinės išleidimo bandymų priemonės.

Informacija apie generinių vaistų deklaracijas
Priemaišų tyrimai yra pagrindinė padavimo informacijos dalis. Pateikus išsamius priemaišų profiliavimo ir kontrolės duomenis, žymiai sumažėja peržiūros išleidimo rizika.

1 atvejis: farmacijos įmonė, tilpeptido generinių vaistų programa
Jie kuria bendrąją tilpeptido versiją ir jiems reikia viso priemaišų kontrolės rinkinio metodo patvirtinimui. Jiems pritaikėme 12 priemaišų: 5 trūkstamus peptidus, 2 oksiduotas priemaišas, 1 dimerą, 2 riebalų rūgščių išsiskyrimo produktus ir 2 susijusias priemaišas. Kiekvieno iš jų grynumas didesnis nei 95%, kartu pateikiami MS ir BMR duomenys. Projekto vadovas sakė: „Tilpeptido priemaišų yra dvigubai daugiau nei kituose peptiduose, bet jūs galite pasigaminti visas, o duomenys yra išsamūs, o tai sutaupo daug darbo“. Vėliau jų metodo įteisinimas buvo sėkmingai baigtas, o dabar ruošiamasi deklaruoti.

2 atvejis: CRO įmonė, priemaišų profiliavimas
Jie ėmėsi kokybiško tilpeptido tyrimo projekto, kuriam reikėjo išsamios proceso priemaišų analizės. Jie atsiuntė mums neapdorotų peptidų mėginius, o mes atlikome LC-MS analizę, nustatėme galimas kelių nežinomų priemaišų struktūras, tada tikslingai jas susintetinome, palyginome sulaikymo laiką ir masės spektrus ir patvirtinome, kad yra keturios naujos priemaišos - dvi iš jų buvo susijusios su linkeriu-, o dvi iš jų buvo su riebalų rūgščių priemaišomis. Klientas naudojo šiuos duomenis, kad patikslintų priemaišų profilius ir sėkmingai išlaikė kliento sutikimą.

3 atvejis: stabilumo tyrimai, biotechnologijų įmonė
Jie tyrė tilpeptido formulės stabilumą ir nustatė, kad skilimo produkto kiekis sparčiai didėjo pagreitintomis sąlygomis, tačiau jie nežinojo, kas tai yra. Išanalizavome mėginį LC-MS ir padarėme prielaidą, kad tai buvo deamidacijos priemaiša tam tikroje Asn vietoje, tada tikslingai susintetinome jį ir patvirtinome palyginimu. Jie atliko tyrimą naudodami šią kontrolę ir tiksliai stebėjo skilimo produkto tendenciją. Vėliau, pateikdami ataskaitą, šią duomenų dalį ekspertai akcentavo ir dėl solidžių duomenų kompensacija nebuvo išrašyta.

Tilpeptidas yra populiarus produktas, tačiau priemaišų tyrimas yra subtilus darbas, ypač riebalų rūgščių šveitimo produktai ir su jungiamaisiais{0}} priemaišomis, kurių daugelis gamintojų negali susidoroti. Jei atliekate kokybiškus tilpeptido tyrimus ar bendro pobūdžio kūrimą ir jums reikia priemaišų kontrolės, nedvejodami susisiekite su mumis. Mes padarėme daug darbo, žinome, kokie yra sunkumai, ir žinome, kaip juos įveikti.